第二章　排放標(biāo)準(zhǔn)

　　第2.0.1條 醫(yī)院污水經(jīng)處理與消毒后，應(yīng)達(dá)到下列標(biāo)準(zhǔn)：

　　一、連續(xù)三次各取樣500毫升進(jìn)行檢驗(yàn)，不得檢出腸道致病菌和結(jié)核桿菌。

　　二、總大腸菌群數(shù)每升不得大于500個(gè)。

　　第2.0.2條 當(dāng)采用氯化法消毒時(shí)，接觸時(shí)間和接觸池出水中的余氯含量，應(yīng)符合表2.0.2的要求：

　　接觸時(shí)間與總余氯量　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　表2.0.2

　　第2.0.3條 污水處理構(gòu)筑物中的污泥，必須經(jīng)過(guò)無(wú)害化處理，污泥排放時(shí)應(yīng)達(dá)到下列標(biāo)準(zhǔn)：

　　一、蛔蟲(chóng)卵死亡率大于95%；

　　二、糞大腸菌值不小于10－2；

　　三、每10克污泥（原檢樣中），不得檢出腸道致病菌和結(jié)核桿菌。

　　第2.0.4條 當(dāng)污泥采用高溫堆肥法進(jìn)行無(wú)害化處理時(shí)，堆肥的溫度必須大于50℃，并應(yīng)持續(xù)5天以上。

　　第2.0.5條 無(wú)上、下水道設(shè)備或集中式污水處理構(gòu)筑物的醫(yī)院，對(duì)有傳染性的糞便，必須進(jìn)行單獨(dú)消毒或其它無(wú)害化處理。

　　第2.0.6條 醫(yī)院污水經(jīng)處理和消毒后，其所含的污染物質(zhì)與有害物質(zhì)的含量應(yīng)符合現(xiàn)行的有關(guān)標(biāo)準(zhǔn)的要求。

 

       第三章　設(shè)計(jì)要求

　　第3.0.1條 醫(yī)院應(yīng)設(shè)置集中式污水處理構(gòu)筑物。嚴(yán)禁采用滲井、滲坑排放污水。

　　第3.0.2條 醫(yī)院職工生活區(qū)和行政區(qū)的污水，應(yīng)與病區(qū)的污水分流。

　　第3.0.3條 醫(yī)院污水處理構(gòu)筑物的位置，宜設(shè)在醫(yī)院建筑物當(dāng)?shù)叵募拘☆l率風(fēng)向的上風(fēng)側(cè)，與周?chē)ㄖ镏g宜設(shè)綠化防護(hù)地帶。

　　第3.0.4條 處理構(gòu)筑物的設(shè)計(jì)，應(yīng)滿(mǎn)足下列要求：

　　一、采取防腐蝕、防滲漏措施；

　　二、確保處理效果，安全耐用；

　　三、操作方便，便于消毒和清掏，有利于操作人員的勞動(dòng)保護(hù)。

　　第3.0.5條 氯化法消毒系統(tǒng)的設(shè)計(jì)，應(yīng)滿(mǎn)足下列要求：

　　一、備有發(fā)生故障時(shí)的應(yīng)急設(shè)施；

　　二、使用液態(tài)氯時(shí)，應(yīng)有安全設(shè)施，嚴(yán)禁直接以鋼瓶向污水中投加氯氣。

 

      第四章　管理要求

　　第4.0.1條 醫(yī)院必須對(duì)污水、污泥嚴(yán)加管理。未經(jīng)消毒或無(wú)害化處理，不準(zhǔn)任意排放、清掏，用作農(nóng)肥。

　　第4.0.2條 醫(yī)院污水處理設(shè)施應(yīng)定期維修，保證正常運(yùn)轉(zhuǎn)，當(dāng)處理設(shè)備發(fā)生故障時(shí)，必須采取適當(dāng)措施，確保污水仍能按標(biāo)準(zhǔn)要求排放。

　　第4.0.3條 醫(yī)院污水處理設(shè)施，應(yīng)配備管理人員和檢驗(yàn)人員。

　　第4.0.4條 醫(yī)院污水的監(jiān)測(cè)，應(yīng)符合下列要求：

　　一、余氯：連續(xù)式消毒，每日至少監(jiān)測(cè)二次，間歇式消毒，每次排放之前監(jiān)測(cè)；

　　二、總大腸菌群數(shù)：每?jī)芍苤辽俦O(jiān)測(cè)一次；

　　三、傳染病和結(jié)核病醫(yī)院，應(yīng)根據(jù)需要增測(cè)致病菌。

　　第4.0.5條 各級(jí)衛(wèi)生防疫部門(mén)，應(yīng)對(duì)轄區(qū)內(nèi)醫(yī)院的污水、污泥處理情況，進(jìn)行經(jīng)常性衛(wèi)生監(jiān)督，每年抽查不得少于二次。

　　第4.0.6條 污水、污泥的檢驗(yàn)方法，應(yīng)符合附錄一的規(guī)定。

 

     附錄一　醫(yī)院污水、污泥檢驗(yàn)方法

　　一污水總余氯的測(cè)定方法

　　一、原理：采用碘滴定法。用碘標(biāo)準(zhǔn)溶液反滴定（與余氯反 應(yīng)后）過(guò)量的硫代硫酸鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液。

　　二、試劑：

　　1、0.00564N硫代硫酸鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液。

　?。?）先配制約0.1N硫代硫酸鈉溶液——稱(chēng)取約25克分析純

　　硫代硫酸鈉（Na2S203·5H2O）溶于煮沸放冷的蒸餾水中，稀釋至1000毫升，加入0.4克氫氧化鈉或0.2克無(wú)水碳酸鈉，儲(chǔ)存于棕色瓶?jī)?nèi)，可保存數(shù)月。

　?。?）標(biāo)定：稱(chēng)取0.1500克干燥的分析純碘酸鉀（KI03）放于250毫升錐形瓶?jī)?nèi)，加入100毫升蒸餾水，加熱溶解后，加入3克碘化鉀和10毫升冰醋酸，靜置5分鐘，自滴定管加約0.1N硫代硫酸鈉溶液，不斷振蕩錐形瓶，直至顏色變?yōu)榈S色；加入1毫升淀粉溶液，繼續(xù)用硫代硫酸鈉溶液滴至剛變?yōu)闊o(wú)色為止，記錄總用量（如滴定完畢，放置若干時(shí)間后，錐形瓶?jī)?nèi)溶液因接觸空氣氧化又顯藍(lán)色?？刹槐卦俚味ǎ?br />
　?。?）計(jì)算：

　　硫代硫酸鈉溶液的當(dāng)量濃度

　　式中W——碘酸鉀重量（克）；

　　　　V——硫代硫酸鈉溶液的用量（毫升）。

　　（4）配制0.00564N硫代硫酸鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液：用除去二氧化碳的蒸餾水，將上面標(biāo)定后的0.1N硫代硫酸鈉溶液稀釋。

　　2、5%碘化鉀溶液溶解50克分析純碘化鉀于少量新煮沸放冷的蒸餾水中，再稀釋至1000毫升，盛于棕色帶玻璃塞瓶中，好冷藏。如發(fā)現(xiàn)溶液顏色變黃，應(yīng)予重配。

　　3、醋酸鹽緩沖液pH＝4稱(chēng)取146克無(wú)水醋酸鈉或243克三水醋酸鈉于蒸餾水中，加480克冰醋酸，用蒸餾水稀釋至1000毫升。4、0.1N碘溶液溶解40克分析純碘化鉀于25毫升蒸餾水中，加入13克分析純碘片，不斷攪拌到溶解為止。移入1000毫升容量瓶中，加水至刻度，混勻，待標(biāo)定。

　　5、0.1000N亞砷酸鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液稱(chēng)取預(yù)先在干燥器內(nèi)經(jīng)濃硫酸干燥的分析純?nèi)趸椋ˋa203）2.4728克于300毫升燒杯中，加入20毫升1N氫氧化鈉溶液，攪拌使溶解（注意Aa203劇毒！）。加1N鹽酸或硫酸中和過(guò)量的氫氧化鈉，直至溶液接近中性為止（采用pH試紙）。

　　將配好的亞砷酸鈉溶液轉(zhuǎn)入500毫升容量瓶中，加水稀釋至刻度，混勻。

　　6、0.1N碘溶液的標(biāo)定

　　準(zhǔn)確量取40～50毫升0.1000N亞砷酸鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液于250毫升錐形瓶?jī)?nèi)。用待標(biāo)定的0.1N碘溶液滴定，以淀粉作指示劑，滴至剛顯淡藍(lán)色為終點(diǎn)。如能在接近終點(diǎn)時(shí)向溶液中通入二氧化碳使之飽和，可得到很準(zhǔn)確的滴定終點(diǎn)。

　　7、0.0282N碘標(biāo)準(zhǔn)溶液

　　將25克分析純碘化鉀放入1000毫升容量瓶中，加入少量蒸餾水使之溶解。準(zhǔn)確加入標(biāo)定后的0.1N碘標(biāo)準(zhǔn)溶液，用蒸餾水稀釋至刻度。所需加入標(biāo)定后的0.1N碘標(biāo)準(zhǔn)溶液的體積，按下式計(jì)算：

　　

　　式中V——標(biāo)定后的0.1N碘標(biāo)準(zhǔn)溶液的毫升數(shù)；

　　　　N——標(biāo)定后的0.1N碘標(biāo)準(zhǔn)溶液的當(dāng)量濃度；

　　　　V′——配制0.0282N碘標(biāo)準(zhǔn)溶液的體積為1000毫升；

　　　　N′——配制的碘標(biāo)準(zhǔn)溶液的當(dāng)量濃度為0.0282N。

　　為了測(cè)定更準(zhǔn)確，好每天用0.1000N亞砷酸鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液按上述操作標(biāo)定一次（預(yù)計(jì)用去5～10毫升0.1000N亞砷酸鈉溶液即可）。

　　此溶液應(yīng)盛于棕色玻璃磨口瓶中，存放時(shí)避免陽(yáng)光直射，不可接觸橡膠制品。

　　8、1%淀粉溶液稱(chēng)取0.5克可溶性淀粉于200毫升燒杯內(nèi)，加少量蒸餾水調(diào)成糊狀，加入剛煮沸的蒸餾水100毫升。冷卻后，加入0.13克水楊酸作保存劑。

　　三、步驟：

　　1 污水水樣中余氯小于10毫克燉升時(shí)，取200毫升污水樣；余氯多時(shí)，應(yīng)按比例減少水樣體積。

　　2 將200毫升污水樣加入500毫升錐形瓶中。加入500毫升0.00564N硫代硫酸鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液，1毫升5%碘化鉀溶液和1毫升醋酸鹽緩沖液，使pH保持在3.5～4.2之間。用0.0282N碘標(biāo)準(zhǔn)溶液滴定，接近終點(diǎn)前，加入1毫升淀粉溶液，滴至剛顯淡藍(lán)色為終點(diǎn)（混勻后藍(lán)色不應(yīng)消失）。把后1滴碘液的體積（約為0.05毫升）從讀數(shù)中減去。200毫升污水樣消耗1毫升0.00564N硫代硫酸鈉溶液時(shí)，相當(dāng)于存在1毫克/升余氯，故余氯在5毫克/升時(shí)，需用5毫升試劑；余氯在10毫克燉升時(shí)，應(yīng)加入10毫升試劑。污水中余氯更高時(shí)，就按比例增加試劑。碘滴定法測(cè)得的余氯為總余氯，并按下式計(jì)算：

　　

　　式中CL2——總余氯（毫克/升）；

　　　　A——0.00564N硫代硫酸鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液的毫升數(shù)；

　　　　B——0.0282N碘標(biāo)準(zhǔn)溶液的毫升數(shù)；

　　　　C——污水樣毫升數(shù)。

　　二污水總大腸菌群的檢驗(yàn)方法

　　一、采樣方法

　　用采水器或其他滅菌容器采取污水樣1000毫升，放入滅菌瓶?jī)?nèi)，如果是經(jīng)加氯處理的污水，需加1.5%硫代硫酸鈉5毫升中和余氯。

　　二、檢驗(yàn)方法

　　總大腸菌群系指一群需氧及兼性厭氧的革蘭氏陰性無(wú)芽孢桿菌在37℃恒溫箱內(nèi)，培養(yǎng)24小時(shí)，能使乳糖發(fā)酵產(chǎn)酸產(chǎn)氣?？偞竽c菌群數(shù)系指每升污水中，所含的總大腸菌群的數(shù)目。

　　（一）初發(fā)酵試驗(yàn)：以無(wú)菌操作將各盛有3倍濃縮乳糖蛋白胨培養(yǎng)液5毫升的5支發(fā)酵管內(nèi)，各接種污水樣10毫升，將各盛有單料乳糖蛋白胨培養(yǎng)液約10毫升5支的發(fā)酵管內(nèi)，各接種污水樣1毫升，再將各盛有單料乳糖蛋白臟培養(yǎng)液約10毫升的5支發(fā)酵管內(nèi)，各接種1∶10稀釋的污水樣1毫升（相當(dāng)于原污水樣0.1毫升）。將此15支管已接種的發(fā)酵管置于37℃恒溫箱內(nèi)，培養(yǎng)24小時(shí)。

　　（二）平板分離：經(jīng)培養(yǎng)24小時(shí)后，將產(chǎn)酸產(chǎn)氣及只產(chǎn)酸不產(chǎn)氣的發(fā)酵管，分別接種于伊紅美蘭培養(yǎng)基或品紅亞硫酸鈉培養(yǎng)基上，置37℃恒溫箱培養(yǎng)18～24小時(shí)，挑選符合下列特征的菌落，取菌落的一小部分，進(jìn)行涂片、革蘭氏染色、鏡檢。

　　1 伊紅美蘭培養(yǎng)基上的菌落色澤：

　　（1）深紫黑色，具有金屬光澤的菌落；

　?。?）紫黑色，不帶或略帶金屬光澤的菌落；

　?。?）淡紫紅色、中心色較深的菌落。

　　2 品紅亞硫酸鈉培養(yǎng)基上的菌落色澤：

　?。?）紫紅色，具有金屬光澤的菌落；

　?。?）深紅色，不帶或略帶金屬光澤的菌落；

　?。?）淡紅色，中心色較深的菌落。

　?。ㄈ?fù)發(fā)酵試驗(yàn)：涂片、鏡檢的菌落，如為革蘭氏陰性無(wú)芽孢桿菌，則挑取上述典型菌落1～3個(gè)接種于一支單料乳糖發(fā)酵管內(nèi)，然后置于37℃恒溫箱內(nèi)，培養(yǎng)24小時(shí)，產(chǎn)酸產(chǎn)氣者（包括小量產(chǎn)氣）即證實(shí)有大腸菌群存在。

　　根據(jù)證實(shí)有大腸菌群存在的陽(yáng)性管數(shù)，查對(duì)總大腸菌群近似數(shù)（MpN）檢索表（附表1.1）即是每升污水中的大腸菌群數(shù)。此MPN表中所列數(shù)值系指100毫升水樣中的細(xì)菌數(shù)，因此需將表中的數(shù)值再乘10、為每1000毫升水中的細(xì)菌數(shù)。舉例：某一污水樣接種10毫升的5支管中有5管為陽(yáng)性；接種1毫升的5支管中有2管為陽(yáng)性；接種1∶10稀釋水樣1毫升（即原污水樣0.1毫升）的5支管皆為陰性，即結(jié)果為5、2、0，查附表1.1得知100毫升污水中總大腸菌群數(shù)為49個(gè)，即1000毫升污水中總大腸菌群數(shù)為49×10＝490個(gè)。

　　總大腸菌群近似數(shù)（MPN）檢索表附表1.1

　?。偨臃N量55.5毫升，其中5份10毫升水樣；5份1毫升水樣；5份0.1毫升水樣）

　　續(xù)表1

　　續(xù)表2

　續(xù)表3

　　續(xù)表4

　　三沙門(mén)氏菌屬和志賀氏菌屬的檢驗(yàn)方法

　　甲、污水

　　一、樣品處理

　　水樣500毫升，加入滅菌的10%無(wú)水碳酸鈉溶液2毫升，混合后，再加入滅菌的10%硫酸鐵溶液1.75毫升，混合均勻。靜置1小時(shí)，傾去上清液（沉淀物約為40毫升左右）。進(jìn)行沙門(mén)氏菌屬和志賀氏菌屬培養(yǎng)。

　　二、增菌培養(yǎng)

　　1 沙門(mén)氏菌屬：吸取樣品處理后的沉淀物20毫升，加于20毫升雙料亞硒酸鹽（SF）增菌液內(nèi)，也可加于亞硒酸鹽甘露醇（SFM）或氯化鎂孔雀綠（MM）增菌液內(nèi)。置于37℃或41℃恒溫箱；培養(yǎng)24小時(shí)。

　　2 志賀氏菌屬：吸取樣品處理后的沉淀物20毫升，加于20毫升雙料革蘭氏陰性（GN）增菌液內(nèi)，置于37℃恒溫箱，培養(yǎng)6小時(shí)。

　　三、平板分離

　　1 沙門(mén)氏菌屬：取上述經(jīng)培養(yǎng)的沙門(mén)氏菌用增菌培養(yǎng)液，接種沙門(mén)氏菌屬——志賀氏菌屬（SS）平板或?？送幸颍℉ekto－en簡(jiǎn)稱(chēng)HE）平板，置于37℃恒溫箱培養(yǎng)24小時(shí)。也可接種亞硫酸鉍（BS）平板，置于37℃恒溫箱，培養(yǎng)48小時(shí)。

　　2 志賀氏菌屬：取上述經(jīng)培養(yǎng)的志賀氏菌用增菌培養(yǎng)液，接種SS平板或HE平板，置于37℃恒溫箱，培養(yǎng)24小時(shí)。

　　四、挑選菌落

　　1 沙門(mén)氏菌屬：挑取在SS平板上，呈無(wú)色透明或中間有黑心，直徑1～2毫米的菌落；挑取在HE平板上，呈藍(lán)綠色，有或無(wú)黑心，直徑1～2毫米的菌落；挑取在BS平板上，呈黑色，培養(yǎng)基周?chē)哂薪饘俟鉂傻木洹?br />
　　2 志賀氏菌屬：挑取在SS平板上，呈無(wú)色透明，直徑1～1.5毫米的菌落，挑取在HE平板上，呈綠色的菌落。

　　3 每個(gè)平板少挑取5個(gè)以上可疑腸道病原菌菌落，轉(zhuǎn)種三糖鐵或其他鑒別培養(yǎng)基中，置于37℃恒溫箱；培養(yǎng)18～24小時(shí)。

　　五、生化試驗(yàn)及血清學(xué)檢驗(yàn)

　　1 沙門(mén)氏菌屬：在三糖鐵培養(yǎng)基中，如不發(fā)酵乳糖，葡萄糖產(chǎn)酸產(chǎn)氣或只產(chǎn)酸不產(chǎn)氣，一般產(chǎn)生硫化氫。有動(dòng)力者，先與沙門(mén)氏菌A～F群O多價(jià)血清作玻璃片凝集，凡與多價(jià)O血清凝集者，再與O因子血清凝集，以確定其所屬群別，然后用H因子血清，確定血清型。雙相菌

　　應(yīng)證實(shí)兩相的H抗原，有Vi抗原的菌型（傷寒和丙型副傷寒沙門(mén)氏菌）應(yīng)用Vi因子血清檢查。

　　化試驗(yàn)：應(yīng)進(jìn)行葡萄糖、甘露醇、麥芽糖、乳糖、蔗糖、靛基質(zhì)、硫化氫、動(dòng)力、尿素試驗(yàn)。沙門(mén)氏菌屬中除傷寒沙門(mén)氏菌和雞沙門(mén)氏菌產(chǎn)氣外，通常發(fā)酵葡萄糖、產(chǎn)氣、均發(fā)酵甘露醇和麥芽糖（但豬傷寒沙門(mén)氏菌、雛沙門(mén)氏菌不發(fā)酵麥芽糖），不分解乳糖、蔗糖，尿素酶和靛基質(zhì)為陰性，通常產(chǎn)生硫代氫。除雞、雛沙門(mén)氏菌和傷寒沙門(mén)氏菌的O型菌株無(wú)動(dòng)力外，通常均有動(dòng)力。如遇多價(jià)O血清不凝集而一般生化反應(yīng)符合上述情況時(shí)，可加做側(cè)金盞花醇、水楊素和氰化鉀試驗(yàn)，沙門(mén)氏菌均為陰性。

　　2 志賀氏菌屬：在三糖鐵培養(yǎng)基上，葡萄糖產(chǎn)酸不產(chǎn)氣，無(wú)動(dòng)力，不產(chǎn)生硫化氫，上層斜面乳糖不分解。

　　生化試驗(yàn)：應(yīng)進(jìn)行葡萄糖、甘露醇、麥芽糖、乳糖，蔗糖、靛基質(zhì)、硫化氫、動(dòng)力、尿素試驗(yàn)。志賀氏菌屬能分解葡萄糖，但不產(chǎn)氣（福氏志賀氏菌6型有時(shí)產(chǎn)生少量氣體），一般不能分解乳糖及蔗糖，宋內(nèi)氏志賀氏菌對(duì)乳糖及蔗糖遲緩發(fā)酵產(chǎn)酸。志賀氏菌屬均不產(chǎn)生硫化氫，不分解尿素，無(wú)動(dòng)力。對(duì)甘露醇、麥芽糖的發(fā)酵及靛基質(zhì)的產(chǎn)生，則因菌株不同而異。

　　如遇多價(jià)血清玻璃片凝集試驗(yàn)為陰性，而生化反應(yīng)符合上述情況時(shí)，可加做肌醇、水楊素、V—P、枸櫞酸鹽、氰化鉀等試驗(yàn)。志賀氏菌屬均為陰性反應(yīng)。

　　血清學(xué)檢查：志賀氏菌屬分為4個(gè)群，先與多價(jià)血清作玻璃片凝集試驗(yàn)，如為陽(yáng)性，再分別與A、B、C、D群血清凝集，并進(jìn)一步與分型血清做玻璃片凝集，后確定其血清型。

　　乙、污泥

　　一、樣品處理

　　用滅菌匙稱(chēng)取污泥30克，放入滅菌容器內(nèi)，加入300毫升滅菌水，充分混勻制成1∶10混懸液。

　　二、增菌培養(yǎng)

　　 1 沙門(mén)氏菌屬：吸取上述1∶10混懸液100毫升，加于100毫升雙料亞硒酸鹽（SF）增菌液內(nèi)，也可加于亞硒酸鹽甘露醇（SFM）或氯化鎂孔雀綠（mm）增菌液內(nèi)。置于37℃或41℃恒溫箱，培養(yǎng)24小時(shí)。

　　2 志賀氏菌屬：吸取上述1∶10混懸液100毫升，加于雙料革蘭氏陰性（GN）100毫升增菌液內(nèi)。置于37℃恒溫箱，培養(yǎng)6小時(shí)。

　　三、平板分離、挑選菌落、生化試驗(yàn)及血清學(xué)檢查均與污水樣品檢驗(yàn)方法相同。

　　四污泥糞大腸菌值的檢驗(yàn)方法

　　一、初發(fā)酵試驗(yàn)：按圖1所示將污泥稀釋?zhuān)謩e將污泥樣品接種于裝有10毫升乳糖膽鹽培養(yǎng)液的內(nèi)有倒管的試管中。再將已接種的四支試管置于44℃恒溫箱，培養(yǎng)24小時(shí)。

　　圖1污泥的稀釋和接種示意圖

　　二、平板分離：經(jīng)培養(yǎng)24小時(shí)后產(chǎn)酸產(chǎn)氣及只產(chǎn)酸不產(chǎn)氣的發(fā)酵管，分別劃線接種于伊紅美蘭培養(yǎng)基或品紅亞硫酸鈉培養(yǎng)基上。置于37℃恒溫箱培養(yǎng)18～24小時(shí)。挑選符合下列特征菌落的一小部分。進(jìn)行涂片，革蘭氏染色，鏡檢。

　　1 伊紅美蘭培養(yǎng)基上的菌落色澤；

　　（1）深紫黑色，具有金屬光澤的菌落；

　?。?）紫黑色，不帶或略帶金屬光澤的菌落；

　?。?）淡紫紅色，中心色較深的菌落；

　　2 品紅亞硫酸鈉培養(yǎng)基上的菌落色澤；

　?。?）紫紅色，具有金屬光澤的菌落；

　?。?）深紅色，不帶或略帶金屬光澤菌落；

　?。?）淡紅色，中心色較深的菌落。

　　三、復(fù)發(fā)酵試驗(yàn)：上述涂片鏡檢的菌落如為革蘭氏陰性無(wú)芽孢桿菌，則挑取該菌落的另一部分再接種于內(nèi)有倒管的乳糖發(fā)酵管中每管可接種分離自同一初發(fā)酵管的典型的菌落1～3個(gè)。置于44℃恒溫箱培養(yǎng)24小時(shí)。有產(chǎn)酸產(chǎn)氣者即證實(shí)有糞大腸菌群存在。按陽(yáng)性管數(shù)查糞大腸菌值檢索表（附表1.2）即得出每升（1000克）糞大腸菌值。例如接種污泥量1克發(fā)酵管陽(yáng)性（＋），0.1毫升發(fā)酵管陰性（－），0.01毫升為陽(yáng)性（＋），0.001毫升為陰性（－）查附表1.2，當(dāng)陽(yáng)性，陰性管數(shù)為＋－＋－時(shí)，糞大腸菌值為0.1。

　　糞大腸菌值檢索表（接種總量1.111克）　　　　　　　　　　　附表1.2

　　五污泥蛔蟲(chóng)卵的檢驗(yàn)方法

　　一、污泥樣品的采集：

　　先把泥堆盡量劃為四等份，而后在每份的中間，用鐵鍬或小鏟各采污泥約500克。同時(shí)，在堆泥的中間也采500克，一并放在塑料桶或搪瓷桶中。攪拌均勻，并挑去固體夾雜物，再?gòu)闹腥〕?00克置于塑料袋或其他容器中，帶回實(shí)驗(yàn)室。

　　二、污泥樣品的處理：

　　將現(xiàn)場(chǎng)帶回的樣品，倒于燒杯中，如遇樣品稍干且有結(jié)塊時(shí)，可將其倒于搪瓷盤(pán)中，再行攪拌，同時(shí)用大鑷子，一面攪拌，一面將硬塊夾碎，去掉肉眼能看出的夾雜物，如腐爛的布條、草梗、小石塊等。然后，將樣品裝入廣口瓶中，貼上標(biāo)簽，標(biāo)明樣品號(hào)碼、醫(yī)院名稱(chēng)、采樣日期和處理前或處理后的情況等。

　　三、污泥樣品的檢驗(yàn)

　　上述樣品處理后，應(yīng)立即進(jìn)行檢驗(yàn)，不能立即進(jìn)行檢驗(yàn)時(shí)，可適當(dāng)加入約5—10毫升3～5%福爾馬林溶液或3%鹽酸溶液，瓶口上放置一個(gè)適宜大小的表面皿。然后放于冰箱內(nèi)，以防微生物的繁殖和抑制蛔蟲(chóng)卵的發(fā)育。

　　1 水洗

　　從已經(jīng)處理過(guò)的500克污泥樣品中，稱(chēng)取100克置于500毫升錐形量杯中，加水約500毫升。用玻璃棒攪拌后靜置之。讓其自然沉淀，經(jīng)1～2小時(shí)后，倒去污泥上面的水，另?yè)Q清水?dāng)嚢韬?，再讓其自然沉淀，?jīng)半小時(shí)后，再倒去上面的水，另加清水，如此反復(fù)進(jìn)行3～4次，直到污泥上面的水接近無(wú)色為止。

　　2 過(guò)濾

　　倒去沉淀上面的清水，用30孔/@金屬篩子過(guò)濾于另一500毫升錐形量杯中，棄去阻留在篩上的泥渣。沉淀20～30分鐘后，倒去沉淀上面的液體、另加清水，如此反復(fù)水洗2～3次，后倒去上清液，將沉淀物倒入10毫升離心管中。經(jīng)2500轉(zhuǎn)/分離心3分鐘后，倒去上清液。

　　3 離心飄浮

　　管內(nèi)注入飽和食鹽水，經(jīng)用玻璃棒攪勻后，離心3分鐘，由于蛔蟲(chóng)卵比飽和鹽水的比重小，所以管中絕大多數(shù)的蛔蟲(chóng)卵均浮聚在液面。（注意：加入食鹽水量不得少于沉淀物的20倍）。

　　4 離心沉淀

　　用毛細(xì)吸管反復(fù)吸取管中斜面上的浮膜于另一離心管中。加入清水，經(jīng)攪勻后，再行離心，蟲(chóng)卵比水的比重大，因而下沉于管底。然后小心倒去上清液。

　　5 培養(yǎng)

　　注入2～3毫升清水于管中,加幾滴5%福爾馬林溶液，置于24～26℃恒溫箱中,培養(yǎng)15～20天。在培養(yǎng)過(guò)程中，清水不得少于0.5～1.0毫升。

　　6 鏡檢

　　樣品經(jīng)培養(yǎng)15～20天后取出。用毛細(xì)吸管吸去上面的清水，余下含蟲(chóng)卵的沉淀物。在一張干凈的載玻片的滴一滴清水。用毛細(xì)吸管吸一小滴沉淀物于水中。涂勻后蓋以蓋玻片，在低倍鏡下檢查，必要時(shí)，再換以高倍鏡。記錄500個(gè)以上死、活蟲(chóng)卵數(shù)。查完一張片子而卵數(shù)不及500個(gè)時(shí)，依同法作第二張涂片檢查。涂片不宜太厚。否則視野模糊不清，影響觀察。一般涂片厚度能以透過(guò)涂片尚能辯認(rèn)報(bào)紙上的字跡為宜。而后在適宜的溫度和濕度下。經(jīng)過(guò)15～20天的培育?；罨紫x(chóng)卵就會(huì)逐漸發(fā)育到幼蟲(chóng)期。而死卵則在同一條件下仍然保持單細(xì)胞期或停留于某一發(fā)育階段。故易于區(qū)別。

　　鏡檢時(shí)為達(dá)到較為快速而明顯地辨認(rèn)幼蟲(chóng)起見(jiàn)，可在載玻片上的滴一滴預(yù)先配好避光保存的30%次氯酸鈉溶液〔商品名為安替福明（antiformin〕以代替清水作成涂片，置于顯微鏡下觀察，可以看見(jiàn)被包在卵的外層的蛋白質(zhì)殼逐漸溶解，使卵內(nèi)的幼蟲(chóng)一目了然。因此亦稱(chēng)此液為脫殼液。如遇沉淀物中渣子較多卵數(shù)較少時(shí)，可以直接注入幾滴此脫殼液于離心管中，與沉淀物混合并攪勻之，而后吸一滴混合液于載玻片上，蓋以蓋玻片，直接鏡檢即可。此時(shí)視野格外清晰。

　　在培養(yǎng)第15～20天未查見(jiàn)幼蟲(chóng)時(shí)，應(yīng)繼續(xù)培養(yǎng)到30天（注意：加過(guò)脫殼液的樣品，不能再繼續(xù)培養(yǎng)）。

　　后，就500個(gè)以上的死、活蛔蟲(chóng)卵數(shù)，求出死卵的百分率。

　　如此檢驗(yàn)的全過(guò)程已告結(jié)束，可從冰箱中取出剩余的樣品，處理之。